Botulisme er en sjælden, men alvorlig sygdom forårsaget af en bakterie kaldet Clostridium botulinum, som forekommer i jord. Den producerer et neurotropisk toksin. Der findes tre former for botulisme, nemlig fødevarebåren botulisme, sårbotulisme og spædbarnsbotulisme. Fødevarebåren botulisme opstår, når man spiser fødevarer, der er forurenet med toksinet. Sår, der er inficeret med toksinproducerende bakterier, resulterer i sårbotulisme. Botulisme hos spædbørn opstår, når C. botulinum-sporer spirer og producerer toksin i spædbørns mave-tarmkanaler ved indtagelse af bakterierne, som regel fra honning. Alle disse tre former for botulisme kan være dødelige og er medicinske nødsituationer.

C. botulinum er en anaerob, Gram-positiv, sporedannende stavformet bakterie, der producerer botulinumtoksin. Botulinumtoksin er en af de kraftigste kendte toksiner (ca. 1 mikrogram er dødelig for mennesker), som forårsager den alvorlige neuroparalytiske sygdom. Der findes syv serologisk forskellige typer af botulinumneurotoksin – type A, B, C, D, E, F og G1. En sammenligning af 16S rRNA-sekvenser viste, at C. botulinum-stammer danner fire forskellige klynger, der svarer til fire fysiologiske grupper (I-IV), hvilket understøttede det historiske klassifikationsskema baseret på biokemiske og biofysiske parametre2. Stammer af gruppe I (proteolytisk C. botulinum) producerer en eller undertiden to toksiner af type A, B eller F; stammer af gruppe II (ikke-proteolytisk C. botulinum) producerer toksiner af type B, E eller F; stammer af gruppe III producerer toksiner af type C eller D; og stammer af gruppe IV producerer toksin af type G3,4.

Botulinum neurotoxin type A (BoNT/A) er den mest undersøgte og bedst karakteriserede af BoNT-serotyperne. En gennemgang af den videnskabelige litteratur viser, at der er ca. tre gange så mange publikationer om BoNT/A som om den næsthyppigste serotype, BoNT/B5. I USA blev der fra 2001 til 2007 rapporteret i alt 139 tilfælde af fødevarebåren botulisme til Centers for Disease Control and Prevention (CDC). Størstedelen af disse tilfælde var forårsaget af forgiftning med BoNT/A (76 tilfælde) eller BoNT/E (46 tilfælde), mens kun 10 tilfælde var direkte forbundet med indtagelse af fødevarer, der var kontamineret med BoNT/B. I samme periode var BoNT/B imidlertid årsag til 387 af de 663 tilfælde af botulisme hos spædbørn (58,4 %), som CDC registrerede6.

Botulinumtoksin virker ved at blokere nervefunktionen og fører til lammelse af åndedræts- og bevægeapparatet. Specifikt virker toksinet ved at blokere produktionen eller frigivelsen af acetylcholin ved synapser og neuromuskulære knudepunkter. Døden indtræder som følge af respirationssvigt. Symptomerne omfatter dobbeltsyn, sløret syn, hængende øjenlåg, sløret tale, synkebesvær, mundtørhed og muskelsvaghed. I alle tilfælde skyldes sygdommen det toksin, der produceres af C. botulinum, og ikke selve bakterien. Læger kan overveje at stille diagnosen botulisme, hvis patientens historie og fysiske undersøgelse tyder på botulisme. Disse spor er dog ofte ikke nok til at stille en diagnose. Andre sygdomme som Guillain-Barré syndrom, slagtilfælde og myasthenia gravis kan ligne botulisme, og der kan være behov for særlige undersøgelser for at udelukke disse andre tilstande. Disse prøver kan omfatte hjerneskanning, undersøgelse af cerebrospinalvæske, nerveledningstest (elektromyografi eller EMG) og en edrophoniumkloridtest (Tensilon) for myasthenia gravis.

En sikker diagnose kan stilles, hvis der påvises botulinumtoksin i maden, mave- eller tarmindholdet, opkast eller afføring. I akutte tilfælde findes toksinet lejlighedsvis i blodet. Botulinumtoksin kan påvises ved hjælp af en række forskellige teknikker, herunder enzyme-linked immunosorbent assays (ELISA), elektrokemiluminescens (ECL)-test og inokulations- eller fodringsforsøg med mus. Toxinerne kan typebestemmes ved hjælp af neutraliseringsforsøg i mus. Ved toksisk-infektiøs botulisme kan organismen dyrkes fra væv. På æggeblomme-medium viser toksinproducerende kolonier normalt overfladeirisering, som strækker sig ud over kolonien. Disse diagnostiske test er nævnt i litteraturen, men er ikke let tilgængelige i Indien. Manglende adgang til kommercielle diagnostiske kits som ELISA, manglende anaerobe dyrkningsfaciliteter på de fleste hospitaler og private virksomheder samt tekniske og etiske vanskeligheder ved at udføre neutraliseringstest på mus gør det meget vanskeligt at bekræfte diagnosen botulisme.

For at undersøge formodede tilfælde af botulismeudbrud i Indien, da der ikke var ELISA-kits til rådighed, tyede vi til neutraliseringstest på mus og molekylære tests som PCR7. Det er imidlertid ikke let at skaffe det botulinum antitoksin, der er nødvendigt for at udføre neutraliseringsforsøg på mus, og der skal et stort antal mus til for at udføre dette forsøg. Da disse test ikke er rutinemæssige diagnostiske test, forsinkes resultaterne af omkostningerne og de formaliteter, der er nødvendige for at inddrage musene.

Molekylære test kan ikke påvise toksin, men kan kun påvise BONT-generne, hvis organismen kan dyrkes. BONT-gener kan også forstærkes direkte fra fødevarer og kliniske prøver, hvis der stadig er organismer til stede der.

Da botulinumtoksin er et vigtigt bioterrorismemiddel, er der et presserende behov for at udvikle interne diagnostiske test. Artiklen af Jain et al.8, der er offentliggjort i dette nummer, havde til formål at udvikle et immundetektionssystem for botulinum neurotoksin serotype B ved hjælp af syntetiske gener. Der blev udviklet en ELISA-test til påvisning af botulinumneurotoksin, og den minimale detektionsgrænse blev også vurderet. Rekombinant BoNT/B-specifikt antistof blev anvendt til at fange antigenet. Resultaterne viste, at det rekombinante BoNT/B kunne påvises op til en koncentration på ca. 15 ng/ml. ELISA er en potentiel teknik, som kan erstatte bioassay. Det udviklede ELISA-system var meget specifikt, hurtigt og kunne anvendes til testning af et stort antal prøver.

Tidligere rapporterede Scotcher et al5 sandwitch ELISA til påvisning af BoNT/A-toksin ved hjælp af specifikke monoklonale antistoffer med god følsomhed og specificitet. Der er blevet udviklet forskellige ELISA-formater, der anvender fluorescerende eller kemiluminescerende substrater for at forbedre testfølsomheden 10-100 gange, men kræver mere specialiseret udstyr9. Der er udviklet adskillige hurtige, følsomme og specifikke test som realtids-PCR, immun-PCR osv. til påvisning af C. botulinum-celler og neurotoksinogenerne. Vores gruppe10 beskrev en multiplex-PCR til samtidig påvisning af botulinum-neurotoksin- og perfringens-toksin-gener. Disse metoder kan dog kun stilles til rådighed på referencecentre. Derfor er ELISA udviklet af Jain et al8 et vigtigt skridt hen imod hurtig diagnosticering af botulinumtoksin i fødevarer og kliniske prøver.

Tallet af tilfælde af fødevarebåren botulisme og botulisme hos spædbørn har ændret sig meget lidt i de seneste år, men sårbotulisme er steget på grund af brugen af sort tjæreheroin, især i Californien11. Selv om botulinumtoxinet ødelægges ved grundig kogning i løbet af nogle få minutter, dræbes selve sporerne ikke af den temperatur, der opnås ved normal kogning under tryk på havniveau, og de kan derfor frit vokse og producere toksinet, når betingelserne er til stede. Den eneste kendte forebyggende foranstaltning mod botulisme hos spædbørn er at undgå at give honning til spædbørn på under 12 måneder. Behandlingen kan omfatte antitoksiner, intensiv medicinsk behandling eller operation af inficerede sår. Derfor kan en rettidig diagnose være livreddende.

Skriv et svar

Din e-mailadresse vil ikke blive publiceret.